阿膠衍生物測(cè)定

阿膠HPLC測(cè)定主要用于氨基酸，特征肽等的成分分析。

色譜條件：

色譜柱：MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm

流動(dòng)相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）：乙睛＝93.0：7.0

配制方法：準(zhǔn)確稱(chēng)取無(wú)水醋酸鈉8.203g于1000mL水中，攪拌均勻，使之溶解，用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.50；準(zhǔn)確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液930mL和乙腈70mL，混合均勻，抽濾過(guò)0.22µm濾膜；  

流動(dòng)相B：水：乙腈＝20.0：80.0

配制方法：準(zhǔn)確量取水200mL和乙腈800mL，混合均勻，抽濾過(guò)0.22µm濾膜；

梯度方法：

梯度程序：

流動(dòng)相A： 0.1mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.50）：乙睛＝93：7

流動(dòng)相B： 水：乙腈＝20：80

T(min)                    A%                    B%

0.0                     100.0                          0.0

11                     93.0                   7.0

13.9                           88.0                    12.0

14                   85.0                           15.0

29                        66.0                          34.0

30                         0.0                    100.0

35                         0.0                    100.0

35.1                       100.0                     0.0  

45                    100.0                                           0.0

流　速：1.0mL/min

柱　溫：43℃

波 長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：5μL

樣品制備衍生過(guò)程

精密量取對(duì)照溶液5ml，加入25ml量瓶中，加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯的乙腈溶液2.5ml，1.0mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時(shí)后，加入50%乙腈水至刻度，搖勻，取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘。取下層溶液，過(guò)濾，取后續(xù)濾液，即得。

色譜圖：

圖1、樣品衍生后

圖2：取樣品溶液1ml加50%乙腈水稀釋1倍。（由于衍生試劑濃度過(guò)大造成樣品測(cè)定過(guò)載，形成峰分叉，樣品稀釋1倍后測(cè)定）

結(jié)論：和曦生物的MorphlingTM Amino Acid 4.6*250mm 5µm的色譜柱可以實(shí)現(xiàn)對(duì)阿膠衍生后的樣品進(jìn)行測(cè)定。